prosdo.ru 1
Бактериологический. Этапы Б.м.: 1) забор материала и его доставка в бакт. лабор.; 2) микроскопия иссл. материала., что дает ориентир.сведения о возб. и позв. выбрать необх. для посева среды; 3) обработка иссл. материала физ. или хим. факторами в целях удаления или уменьш. посторон. микрофлоры( при исслед. мокроты, выделении спорообрю микробов); 4) посев иссл. материала на пит. среды для получения изолир. колоний; 5) инкубация засеянных пит. сред. в термостате при 37°С 1-2 дня. Если рост отс., срок инкубации может быть продлен еще на 2 - 3 дня. 6) исслед. колоний. - выбирают однород. изолир. колонии, обозначаютих. 7) пересев с колоний на среды накопления (петлей на скош.агар); 8) инкубация посевов в термостате до появления сплошного роста (1- 2 дня); 9) макроскоп. и микроскопия; 10) идентификация выд-й чистой к-ры и в случае необх. опр-ие разл.биол. св-в; 11) заключение о вид. принадлежности выделенной к-ры и ее св-вах. Заключение дается на официальном бланке со ссылкой на номер, под крым эта к-ра занесена в лабораторный журнал. Б.м. является основным в д-ке большинства бактер. инфекций.

Дыхание бактерий. по типу биол. окисл: 1 группа – облиг. аэробы; спос. получать энергию только путем дыхания и нужд. в молекулярном кислороде как конечном акцепторе электронов. Для них как тип ок.-восст. процессов характерно окисление, при кот. конеч. акцептор= кислород. 2 группа - облиг. анаэробы; спос. расти только в среде, лишен. кислорода. Для них как тип ок.-восст. процессов характерна ферментация, при кот. происх. перенос электронов от субстрата-донора к субстрату-акцептору. 3 группа – факульт. анаэробы; спос. расти как в присутс., так и в отс. кислорода, и исп. в качестве термин. акцепторов электронов как молекулярный кислород, так и органич. соед-ия. 4-микроаэрофилы- при пониж.парциал. давл.* Среди них могут быть аэротолерант. факульт.-анаэроб. бактерии, кот.могут расти в присутс. атмосфер. кислорода, но не исп. его, а получают энергию исключит. с пом. брожения (напр., лактобакт.).
Капсула. У нек. бактерий слизистые или клейкие секреты обр. капсулы; капсулы хорошо видны после негатив. контрастирования (когда окраш. не препарат, а фон). капсулы обесп. доп. защиту для бактер. клетки. Так, напр., капсулир. штаммы пневмококков свободно размнож. в орг-ме человека, вызывая восп-ие легких, тогда как некапсулир. штаммы легко атакуются и разрушаются фагоцитами. Жгутики: бактерии подвижны, что обусл. наличием у них одного или неск. Ж. - это полый цилиндр, обр. белк. молекулами. Подвижность достигается вращением основания жгутика; пример: Rhizobium (1 жгутик) и Azotobacter (много); обе уч. в круговороте азота в природе. Аэроб. бактерии перемещ. в направлении увелич. конц-ции кислорода в среде, а подвижные фото-синтезир. бактерии плывут к свету. лучше всего видны в эл. микроскопе при использовании метода напыления. * На клет. стенке нек. грам "-" бакт. видны многочисл. тонк. палочковид. выросты,= пили. Они служат для прикрепл. к специфич. клеткам или поверхностям. Известны раз.типы пилей, наиб. важным явл. секс-пили, уч. в половом размн.


Метаболизм бактерий. ЭНЕРГ: основыв. на фототрофии, исп. света ч/з фотосинтез, или на хемотрофии, использовании химич. в-в для получения энергии. Хемотрофы дел. на литотрофов, кот. исп. неорганич. доноры электронов для дыхания, и органотрофов, кот. исп. органич. соед-ия в качестве доноров электронов. Чтобы исп-ть химич. соед-ия как ист-к энергии, электроны берутся из возобновл. в-в и перемещают к акцепторам электронов в процессе ок.-восст. р-ции. Эта реакция высвобожд. энергию, кот. может исп. для проведения метаболич. р-ций. В аэробных орг-мах в качестве акцептора электронов = кислород. В анаэробных = др. неорганич. в-ва, напр., нитраты, сульфаты. КОНСТ: совокупность р-ций биосинтеза, в рез. кот. за счет в-в, поступ. извне, и промеж. продуктов, обр. при Энерг.М., синтезируется в-во клеток. Этот процесс связан с потреблением свободной энергии, запасенной в молекулах АТФ или др. богатых энергией соед-иях. * Ферменты =протеолитич: протеазы, катализ. расщепление белков. В рез. расщепления молекулы белка обр. высокомолек. промежут. продукты распада - пептоны, альбумозы и полипептиды; сахаролитич: под их действием сахара расщепл. на альдегиды и кислоты. Конеч. прод. их расщепл. = газообр. в-ва: СОг и Нг. Характерно, что разл. виды и даже разновидности микробов относятся по-разному к одним и тем же сахарам. Для обнар. сахаролит.ф. -засевают в среды Гис-са.* К конститутивным отн. ф., кот. синтез. клеткой независимо от наличия в питательной среде соотв. субстрата.

Методы выделения. 1) Цейсслера - для выд. чистых культур спорообр. анаэробов. Для этого произв. посев на среду Китт-Тароцци, прогревают 20’ при 80 °C (для уничтож. вегетатив. формы), заливают среду вазелин. маслом и инкуб. 24 ч в термостате. Затем посев на сахарно-кров. агар для получения чист. культур. После 24-час. культивирования интересующ. колонии изучаются - их пересеивают на среду Китт-Тароцци . 2) Фортнера - посевы на чашку Петри с утолщ. слоем среды, разд. пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре. 1 половину засевают культуру аэроб. бакт, на 2- анаэроб. Края чашки заливают парафином и инкуб. в термостате. Сперва наблюдают рост аэроб. микрофлоры, а затем - рост аэробной резко прекращ. и нач. рост анаэробной. 3) Вейнберга - для получения чистых культур облигат. анаэробов. Культуры, выращ. на среде Китта-Тароцци, переносят в сахар. бульон. Затем 1раз. пастер. пипеткой материал переносят в узкие пробирки (трубки Виньяля) с сахар. МПА, погружая пипетку до дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлажд, что позв. фикс. материал в толще затверд. агара. Пробирки инкуб. в термостате, а затем изучают выросшие колонии. При обнаружении интерес. колонии на её месте делают распил, материал быстро отбирают и засеивают на среду Китта-Тароцци. 4) Перетца- в расплавл. и охлажд. сахар. агар вносят культуру бактерий и заливают под стекло, помещ. на пробковых палочках в чашку Петри.


Механизм. ПРОД: репродукция вируса. ИНТЕГР: интеграция вирусной НК в клеточный геном. ПРОД: 1) адсорбция - прикрепл. вириона к клет. рецепторам, предст. собой гликопротеины клет. мембр., сод. нейрамин. к-ту. 2) проникн. вируса в клетку хозяина: а) рецепторно-опосред. эндоцитоз с обр-ием в месте взаимодействия вириона с клет. рецептором пузырьков. б)Виропексис. - в клетку проник. сложноустроен. вирусы. Он закл. в слиянии мембран - вирусного суперкапсида с клеточной или ядерной мембраной. Данный процесс происходит при помощи специального бека слияния - F-белка, который находится в суперкапсиде. 3) транспорт вируса внутри клетки (с пом. внутрикл. мембр.пузырьков, в кот. вирус переносится на рибосомы, эндоплазм. сеть или в ядро) 4) «раздевание» вириона - депротеинизация и освобожд. от суперкапсида и капсида, кот. препятс. репликации вирус. НК. 5) эклипс-фаза, = исчезн. вириона, т.к. он перестает обнаруживаться при микроскопии. В эту стадию нач. синтез компонентов вириона, т.е. его репродукция.

Микробиология (греч. micro-малый, bios-жизнь и logos-учение)- наука о мельчайших орг-мах, Среди микроорганизмов различают: 1) Эук.-грибы и простейшие; 2) Прокар.-бакт., риккетсии, микоплазмы; 3) вирусы. Изуч. морфологию, физиологию (питание, рост, размножение), иммунологию, генетику и экологию микроорг-ма, имеющ.мед. значение.1й этап-описат.(XVIIв.) берёт нач.от перв.набл-ний Левенгука, кот.изгот.микроскоп(160-300раз); описал все осн.формы бакт., назвав их жив. зверьками.*были уст-ны возбудители фавуса (И. Шенлейн, 1839) и стригущ.лишая (И. Груби, 1843), в крови больных животных обнар.бациллы сибир.язвы (А. Поллендер, 1849; К. Давен, 1850). 2й этап(физ-лог.). факты 1го периода были обобщены и приумножены франц.уч.Луи Пастером(2пол.19в.). Работы: эпохальные открытия сущности брожения (1857), микроб.обусловл-сти и заразности инфекц.болезней (1881), методов изготовл.вакцин и способов предохр. от курин.холеры, сибир.язвы(bac.antracus) и бешенства (1882–1885).В 1874 г. Джозеф Листер первый применил пастеровские принципы в хирургии, которые в связи с достижениями в области асептики получили самое широкое распространение. С 1884г. стали прим.вакцины с целью профилактики бешенства и заразных заболеваний; 3й этап(Иммун.) Основополож. - Мечников (конец19- нач.20вв.)- творец фагоцит.теории иммунитета, за разработку кот.ему была присуждена Нобелевская премия; положил нач.учению об антагонизме микробов, о причинах преждеврем.старения и возможности продления жизни человека, внес большой вклад в изучение туберкулеза, холеры, сифилиса.


Морфология. Спирохеты- тонкие спирально извитые нити, изогнутые вокруг спиральной оси-пучек слившихся фибррилл. Это цитоплазматические цилиндры, мембрана из наружная и пептидогликановый слой (двиг. аппарат = фибриллы; по Ром.-Гимзе окраш. в фиолетовый цвет. Облад. генетич. аппаратом, сост. из неб. размеров линейной хромосомы и набора цирк. и линейн. плазмид.). Рикетсии(облигатны-вну.клетки)- прокариот. микроогранизмы. Мелкие полиморфные бактерии,кокки, палочки, нити. +микрокапсула, сод. группоспециф. «растворимый» антиген. В клет. стенке - основные белки, большинство из которых явл. видоспециф. антигенами, а также липоПС и пептидогликан. В цитопл. мембр. – ненасыщ. ЖК, имеет специфич. транспорт. систему АТФ-АДФ. Нуклеоид сод. кольцевую хромосому). Хламидии- бактериоподоб. неподвиж. бескапсул. грам"-" 0,3 мкм (обр.эндотоксин; у нек. хламидий - белок тепл.шока, спос. выз. аутоиммун. р-ции;; мелкие, грам «-» бактерии, шаровид.. Не обр.спор, нет жгутиков и капсулы. Клет. стенка: 2-х слойная мембрана. + гликолипиды. По Граму – красный цвет. * 2 формы: неактив. инфекц. частицы, вне клетки); ретикулярные тельца (внутри клеток, вегетативная форма). Микоплазмы-утратили Кл. стенку в процессе эволюции.0,2 мкм, окружены мембраной, покрытой снаружи капсулоподобным слоем.

Основные принципы. В лабор. усл. микроорг-мы выращ. на пит. средах, кот.должны быть стерил., прозрач, влаж., сод. опр. пит. в-ва (белки, углеводы, вит.), обладать опр. буферностью, иметь соотв. рН. Питательные среды : 1) по консистенции- жидкие, полужид, плот.; 2) происх. — живот. или раст. происх. и синтет. среды; 3) по назначению - универсальные, дифференц., элективные и среды специальные. Обычные = д/культив. многих видов патоген. и непатоген. бактерий. Дифференц. = позв. различать бактерии разных видов и родов по их культуральным и биохимич. св-вам. Элективные = благоприятств. размн. бактерий опр. видов и подавл. рост др. микробов.Спец. среды = наиболее оптимал.для выращи. бакт., не размн. на общихсредах.

Открытие микроорг. Можно отнести к1й этапу-описат.(XVIIв.) когда Левенгук изгот.микроскоп(160-300раз); описал все осн.формы бакт., назвав их жив. зверьками(animalcula viva). + первым открыл эритроциты, описал бактерии (1683), дрожжи, простейших, волокна хрусталика, чешуйки (ссохшиеся клеточки) эпидермиса кожи, зарисовал сперматозоиды (1677), строение глаз насекомых и мышеч. волокон. + почкование гидр и т. п. Открыл инфузории и описал многие их формы.

Работы Коха.Большую роль в ист. развития микробиологии сыграли труды немецкого ученого Р. Коха (1843–1910), который разработал метод выд-ия чистых культур микроорганизмов на плотных пит. средах, в частности ввел в практику агар–агар, желатину, свернутую сыворотку, кусочки овощей, предложил методы окраски бактерий анилиновыми красителями, усовершенст. микроскоп, благодаря чему выделил и описал возб. сибир. язвы(bacillus anthracis), туберкул. (Mycobacterium tuberculosis) и холеры(Vibrio holerae), а его ученики и последователи к концу 19 в. открыли почти всех др. возбудителей бактер. инфекций.

Рост. Способы размн. у разл. групп микроорганизмов неодинак: бактерии, риккетсии, спирохеты размн. путем попереч. деления на 2 равноцен. особи. ; Грам+ бактерии делятся путем обр-ия перегородки, врастающей от периф. к центру. У микобактерий туберкулеза попереч. перегородка обр. внутри клетки, затем она расщепл. на 2 слоя и клетка дел. на 2 части, В обр-ии перегородки прин. участие как цитоплазм. мембрана, так и клеточ.стенка. * Рост бактерий и спирохет не всегда сопровожд. их делением. Соли желчных кислот, мыла, пенициллин, ультрафиол. лучи задерж. деление. *ФАЗЫ: 1 фаза - латентная: бактерии адаптир. к пит. среде, рост не наблюд; 2 фаза - log роста (экспоненц.), когда бактерии энергично растут, увелич., при достиж. опр. размера нач. дел. на 2 дочер. кл. 3 фаза - стационар. роста, в этот период в пит. среде кол-во пит. в-в значительно уменьш., а накопл. продуктов обмена увелич. Усл. жизни для микроорг-мов = все менее благопр. 4 фаза - отмирания, когда клеток бактерий становится все меньше и они погибают. Полная гибель микробов в культуре может наступить через неск. недель или месяц., что зависит от вида микроба, р-ции среды и др. факторов.


Систематика. Вид-эволюционно сложившаяся совокупн. особей, имеющих единый тип орг-ции, кот. в стандарт. усл. проявл. сходными фенотипич. признаками. Виды-роды-семейства-подцарства-царства. Надцарство-прокариот, царство-эукариот, грибы-к царству микота, простейшие- к царству протозоа. Таксономич. системы: Нумерич. таксономия-равноценность всех фенотипич. признаков. Хемотаксономия(изуч. химич. состав), генотаксономия(изуч. по рез. ген. материала), серотаксономия- на определение соотв. антигенов с помощью сывороток. У прокариот: нет мембран, только цитопл. мембр., ядро= нуклеоид- фибриляр. структура, нет митох., хлоропластов, пластинч. комплекса гольджи, отс. митоз. Размнож. путем бинар. деления, нет клет.центра.
Споры. - особый тип покоящихся репродукт. клеток, хар. резко сниж. уровнем метаболизма и высок. резистентностью; Способностью к обр-ию спор облад. палочковид. грам+ бактерии родов Bacillus и Clostridium, из шаровид.бакт.- лишь единич. виды, напр., Sporosarcina. Как правило, внутри бакт. клетки обр. только 1 спора.Осн. ф-ция спор – сохр-ие бактерий в неблгопр. усл. внеш. среды. Переход бактерий к спорообр-ию набл. при истощении питательного субстрата, недостатке углерода, азота, фосфора, накоплении в среде катионов К и Mn, изм. рН, повыш. содерж. кислорода, etc.

Строение. У грам»-« муреиновая сеть однослойная. Наряду с этим - большие количества липопротеинов, липо-ПС и других липидов, которые как бы наклеены снаружи на муреиновый каркас. Для сохранения липоПС слоя необх. ионы Са. * В клет. стенке грам«+» ПС, если они вообще имеются, связ. между собой ковалентно. Содерж. белков невелико. !!! особенность-наличие тейхоевых кис­лот; это цепи, сост. из 8-50 остатков глицерола или рибитола, связ. м/у собой фосфат.мостиками.* ИЛИ: пептидогликан= параллельными полисахар. цепями. У грам+ пептидогликан+тейхоевые и липотейхоевые кислоты+ белок. У грам- липопротеид+ ЛПС. Протопласты- безоболоч. формы бактерий в рез. действия пеницилина лишены клет. стенки. L-формы-бактерии, полностью или частично утратившие клет.стенку, но сохр. способность к размножению.


Типы и механизмы. Автотрофы= живут в воздухе; исп. неорганич. соед-ия для построения орган. в-в бактерии; могут исп. энергию солнеч. света (цианобактерии); могут исп. энергию неорг. в-в (серобактерии, железобактерии)* Гетерогтрофы= живут в бескислород. среде. Сапрофиты извлекают питат. в-ва из мёртв. тел. Паразиты питаются органич. в-вами живых тел. * Мутуализм (симбиоз) тесн. взаимосвязь м/у 2 орг-мами, выгодн.для обоих. (E.coli, обит. в киш-ке, поставл. человеку вит. В и К.) * Транспорт в-в в кл. 1. Пассив. дифф. Без энерг. затрат по градиенту конц-ии = Н2О, О2, СО2. 2. Облегч. дифф. при уч. мембр. белков- транслоказ. 3. Актив. транспорт а)при участии спец. белков-пермеаз. б) при уч. мембр. белков-транслоказ. И фосфолирировании переносимой молекулы в процессе её прохожд. через мембр.

Царство вирусов. мельчайш. микробы, не имеющие клет. строения, белоксинтез. системы, сод. только ДНК или РНК. Отн. к царству Vira. Являясь облигатными внутрикл. паразитами, вирусы размн. в цитопл. или ядре. Они – автоном. генетич. структуры. ; дисъюнктив. размнож : в клетке отд. синтез. НК вирусов и их белки, затем происх их сборка в вирус. частицы. Сформированная вирус. частица = вирион. * Форма вирионов : палочк (вирус табач. мозаики), пулевид. (бешенства), сферич. (ВИЧ). *Простые, или безоболоч., сост. из НК и белковой оболочки (капсид). НК и капсид взаимод. друг с другом, образуя нуклеокапсид. * Сложные, или оболоч., вирусы снаружи капсида окружены ли-попротеин. оболочкой (суперкапсид). На оболочке вируса расп. гликопротеин. шипики *Вирус натур.оспы образует цитоплазмат. вкл-ия - тельца Гварниери; вирусы герпеса и аденовирусы – внутриядер. вкл-ия. * Размеры вирусов определяют с помощью электронной мик¬роскопии, методом ультрафильтрации через фильтры с извест. d спор, методом ультрацентрифугирования. Одним из самых мелк. вирусов - вирус полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным – натур. оспы (около 350 нм). * различают ДНК-содерж. и РНК-содерж. вирусы. ; гаплоидны, =один набор генов. Геном вирусов предст.НК: 2нитчатыми, 1нитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментир. *ПРИОНЫ- белк. инфекционные частицы, являющиеся агентами белковой природы, имеющие вид фибрилл размером 10—20x100—200 нм. * ВИРОИДЫ- неб. молек. кольц., суперспи-рализованной РНК, не сод. белка, выз. заболевания у растений. ИВАНОВСКИЙ: возбудитель табачной мозаики, + труды по фитопатологии и физиологии растений.